一、 目的
使用恒溫培養(yǎng)箱、恒溫水浴鍋、了解細胞分裂素對離體子葉的保綠作用及基本原理和方法。
二、原理 細胞分裂素可阻礙核酸水解酶和蛋白水解酶的產(chǎn)生,因此能延緩器官衰老,使離體葉片保綠,保綠作用的強弱可通過測定葉綠素含量的變化來衡量,也可由葉色變黃枯死的時間來衡量。
三、材料、儀器設(shè)備及試劑
1. 材料:黃瓜子葉;蘿卜子葉。
2. 儀器設(shè)備:電子分析天平;分光光度計;恒溫培養(yǎng)箱;恒溫水浴鍋;25ml容量瓶;25ml刻度試管;試管架;移液管;黃瓜子葉的培養(yǎng)皿(直徑5cm);瓷盤;刀片;尖頭鑷子;濾紙;吸耳球等。
3. 試劑及配制:100μg·ml-16-BA溶液;95﹪乙醇 ;CaCO3粉末。 100μg·ml-16-BA母液配制:準確稱取6-BA 10mg, 加幾滴1mol·L-1HC1溶解(可稍加熱溶解),然后慢慢加入蒸餾水稀釋后定容至100ml。
四、實驗步驟
1. 黃瓜幼苗的培養(yǎng) 精選黃瓜種子,播入墊有濾紙的瓷盤中,加蒸餾水使之濕潤(注意種子不能漬水),待種子萌發(fā)后,在光下培養(yǎng)2~3d左右,直至子葉綠化。備用。
2. 系列濃度6-BA溶液配制:吸取100μg·ml-16-BA母液,稀釋成10、5、0.5 μg·ml-1的系列濃度溶液。
3. 離體黃瓜子葉的培養(yǎng)
(1)取4套培養(yǎng)皿,編號,每套培養(yǎng)皿各墊一張濾紙,分別作0.5、5、10μg·ml-1的6-BA溶液和蒸餾水(CK)4個處理,即為組。
(2)選取子葉大小、生長一致的黃瓜幼苗20株,每處理5 株(10片子葉),用刀片切下不附帶葉柄的子葉,分別稱取鮮重,將數(shù)據(jù)記入下表中。然后將子葉放入組相應(yīng)編號的培養(yǎng)皿中,分別加入不同濃度的6-BA溶液3ml, 對照(CK)加蒸餾水3ml。蓋上培養(yǎng)皿蓋,置于暗處,溫度25-28℃培養(yǎng)3 d 。 另取與組相同的黃瓜幼苗20株,用刀片切下不附帶葉柄的子葉作第二組,直接用來測定葉綠素含量。
4. 第二組黃瓜子葉葉綠素含量的測定
(1)葉綠素的提取 取3支25ml刻度試管,編號。稱取第二組的黃瓜子葉三份(3個重復(fù)),每份10片子葉,然后放入相應(yīng)編號的刻度試管中,各加入少量CaCO3粉及95﹪乙醇3-4ml,用玻棒小心將子葉搗碎后,將試管放入45℃恒溫水浴提取葉綠素30min左右,直到子葉碎片無色為止,用濾紙過濾于25ml容量瓶中(如殘渣仍帶綠色,可再加幾ml乙醇繼續(xù)提取,直至殘渣無綠色)。濾紙上的色素用乙醇慢慢點滴清洗入容量瓶中,后定容至刻度,搖勻,待測。
(2)葉綠素含量的測定 在652nm波長處,以95﹪乙 醇為空白對照,測定葉綠素提取液的吸光度(A值)。并按公式計算出葉綠素含量。即為培養(yǎng)前子葉的原始葉綠素含量。
5. 組黃瓜子葉葉綠素殘留量的測定 組黃瓜子葉在暗處培養(yǎng)3d后,按上述第(4)步驟方法分別測定各處理子葉葉綠素含量,并按公式計算出各處理葉綠素含量,即為暗培養(yǎng)后子葉葉綠素含量。
五、結(jié)果計算 葉綠素含量計算公式:
D652 × 提取液總量(ml) 葉綠素含量(mg·g-1Fw)= —————————————— 34.5 × 樣品鮮重(g) 公式中:D652 — 在652nm波長下測定的吸光度值 34.5— 葉綠素a、b在652nm波長處的比吸收系數(shù) 培養(yǎng)后葉綠素含量 暗培養(yǎng)后葉綠素含量占培養(yǎng)前葉綠素含量(﹪)= —————————×100 培養(yǎng)前葉綠素含量
六、恒溫培養(yǎng)箱、恒溫水浴鍋詳情可咨詢喆圖小編。
版權(quán)所有©2024上海喆圖科學(xué)儀器有限公司 備案號:滬ICP備14016230號-5 管理登陸 sitemap.xml 技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng)