喆圖小編來給大家講講實(shí)驗(yàn)?zāi)康娜缑割惖纳a(chǎn),建立合適、的篩選模型,并從特定的樣品如海泥中篩選出高產(chǎn)菌株。
實(shí)驗(yàn)所需儀器設(shè)備:滅菌鍋,電熱恒溫培養(yǎng)箱,恒溫?fù)u床,玻璃儀器
需準(zhǔn)備的培養(yǎng)基 A.富集培養(yǎng)基(液體):海水2216E 液體培養(yǎng)基、蛋白胨5.0,酵母粉1.0,陳海水1L,pH7.6。取50mL 分裝250mL 三角瓶后,8層紗布封口,外包1層牛皮紙, 115℃高溫滅菌30min。 B. 2216E 斜面(固體):
海水2216E 液體培養(yǎng)基中加入2%的瓊脂粉,加熱溶化瓊脂,每支試管內(nèi)加入5mL,115℃高溫滅菌30min,滅菌后擺斜面。
無菌生理鹽水:NaCl 0.85% 去離子水配制。每支試管加入4.5mL,蓋上試管帽、包扎、115℃高溫滅菌30min。
堿性蛋白酶篩選培養(yǎng)基:海水2216E-脫脂奶粉平板:
A:4%脫脂奶粉,蒸餾水;
B:海水2216E 液體培養(yǎng)基中加4%瓊脂粉,pH10.0。A 和B 115℃高溫滅菌30min 后稍冷卻,將A在無菌超凈臺(tái)中倒入B中,搖勻后倒入無菌平板。
取少量海泥樣品加入富集培養(yǎng)基中,28℃,150rpm 于恒溫振蕩培養(yǎng)24個(gè)小時(shí)。
搖勻富集后的富集培養(yǎng)液,用無菌生理鹽水作梯度稀釋至10-5、10-6后各涂1個(gè)篩選平板, 在28℃電熱恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 小時(shí)。
產(chǎn)蛋白酶菌株的篩選
觀察篩選平板上所產(chǎn)生的水解圈,拍照。每組選取1株水解圈大而明顯的菌株,接在斜面上培養(yǎng)。
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