四虎免费视频,久久久国产精品无码一区二区三区,无码国产精品大全,熟女综合91

歡迎光臨上海喆圖科學(xué)儀器有限公司網(wǎng)站!

掃碼加微信

咨詢(xún)熱線

17321051213

當(dāng)前位置:首頁(yè)  >  技術(shù)文章  >  Transwell遷移/侵襲實(shí)驗(yàn)

Transwell遷移/侵襲實(shí)驗(yàn)

更新時(shí)間:2019-03-12  |  點(diǎn)擊率:1335

 

        基本原理

        將Transwell小室放入培養(yǎng)板中,小室內(nèi)稱(chēng)上室,培養(yǎng)板內(nèi)稱(chēng)下室,上室內(nèi)盛裝上層培養(yǎng)液,下室內(nèi)盛裝下層培養(yǎng)液,上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酯膜相隔。我們將細(xì)胞種在上室內(nèi),由于聚碳酸酯膜有通透性,下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內(nèi)的細(xì)胞,從而可以研究下層培養(yǎng)液中的成分對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、運(yùn)動(dòng)等的影響。

        應(yīng)用不同孔徑和經(jīng)過(guò)不同處理的聚碳酸酯膜,就可以進(jìn)行共培養(yǎng)、細(xì)胞趨化、細(xì)胞遷移、細(xì)胞侵襲等多種方面的研究。侵襲實(shí)驗(yàn)中使用到的Matrigel 是從小鼠EHS肉瘤中提取的基質(zhì)成分,含有LN、IV型膠原、接觸蛋白和肝素硫酸多糖,鋪在無(wú)聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯濾膜上,能在DMEM培養(yǎng)基中重建形成膜結(jié)構(gòu),這種膜結(jié)構(gòu)與天然基質(zhì)膜結(jié)構(gòu)極為相似。

        Transwell小室的濾膜孔徑一般為8μm,在侵襲實(shí)驗(yàn)中,膜孔都被Matrigel覆蓋,細(xì)胞不能自由穿過(guò),必須分泌水解酶,并通過(guò)變形運(yùn)動(dòng)才能穿過(guò)這種鋪有Martrigel 的濾膜,這與體內(nèi)情況較為相似。細(xì)胞欲進(jìn)入下室,先要分泌基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)將基質(zhì)膠降解,方可通過(guò)聚碳酸酯膜。計(jì)數(shù)進(jìn)入下室的細(xì)胞量可反映腫瘤細(xì)胞的侵襲能力。

        所需材料

ØTranswell小室

Ø細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基

Ø胎牛血清

Ø胰蛋白酶

ØPBS

Ø青霉素-鏈霉素溶液(100×)

Ø結(jié)晶紫或臺(tái)盼藍(lán)

Ø甲醇

ØMatrigel(侵襲實(shí)驗(yàn))

        主要試劑配置

(1)PBS磷酸鹽緩沖液: PBS粉劑每袋加ddH2O定容至1000ml,調(diào)pH7.2,121℃,30min,高壓滅菌,4℃保存。

(2)細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基:低溫培養(yǎng)箱-20℃保存,臨用前按體積比配成含10% FBS和1%青霉素-鏈霉素雙抗的*培養(yǎng)液。

        操作步驟

1.所有細(xì)胞培養(yǎng)試劑和細(xì)胞培養(yǎng)池放在電熱恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)37℃溫育;

2.待測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,消化細(xì)胞,用PBS和無(wú)血清培養(yǎng)基先后洗滌1次,用無(wú)血清培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞,計(jì)數(shù),調(diào)整濃度為2×105 /ml;

3.如進(jìn)行侵襲實(shí)驗(yàn),將Matrigel膠從-20℃取出于4℃冰箱過(guò)夜,在4℃條件下將Matrigel膠用無(wú)血清的細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋至300 μl/ml,取100 μl均勻涂抹一層于細(xì)胞培養(yǎng)池的PET膜上表面,然后將培養(yǎng)池輕輕放入24孔板孔內(nèi),37℃放置3 h左右,取出于超凈工作臺(tái)過(guò)夜干燥。

注:如進(jìn)行遷移實(shí)驗(yàn),則跳過(guò)這一步驟

4.在下室(即24孔板底部)加入600-800 μl 含10%血清的培養(yǎng)基,上室加入100-150 μl細(xì)胞懸液,繼續(xù)在孵箱培養(yǎng)24 h;

5.將其下表面浸泡在70%甲醇溶液中,固定30 min~60 min,用結(jié)晶紫或臺(tái)盼藍(lán)染色,鏡檢,并計(jì)算PET膜下表面的細(xì)胞數(shù),計(jì)算中間和四周5個(gè)視野,取平均值。

        實(shí)驗(yàn)結(jié)果

鏡下對(duì)染色后的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù),計(jì)數(shù)值高,則該組細(xì)胞遷移/侵襲能力強(qiáng)。

        以上設(shè)備詳情,請(qǐng)咨詢(xún)上海喆圖。

企業(yè)地址
上海張江醫(yī)療器械產(chǎn)業(yè)基地(瑞慶路528號(hào))
企業(yè)郵箱
xuxinxin@zhetu.com
手機(jī)
17321051213
電話
0

版權(quán)所有©2024上海喆圖科學(xué)儀器有限公司    備案號(hào):滬ICP備14016230號(hào)-5    管理登陸    sitemap.xml    技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng)