原代細(xì)胞培養(yǎng)是指從活體中獲取的組織或細(xì)胞,在體外模擬體內(nèi)的生理環(huán)境,在 無菌、適當(dāng)溫度和一定營養(yǎng)條件下,使之生存、生長和繁殖,下面由喆圖小編帶大家了解一下原代細(xì)胞培養(yǎng)中產(chǎn)生的問題。
錯誤1:一小管原代細(xì)胞在水浴中解凍一段時間
糾正1:原代細(xì)胞對解凍過程非常敏感,因此將小瓶置于37℃水浴鍋中,保持并輕輕旋轉(zhuǎn)直到內(nèi)容物剛剛解凍是很重要的。然后應(yīng)立即從水浴中取出小瓶,并轉(zhuǎn)移到無菌操作臺。確保您的培養(yǎng)瓶在解凍前已經(jīng)準(zhǔn)備就緒,以便可以立即用于接種細(xì)胞,并置于培養(yǎng)箱中。
錯誤2:解凍match小瓶后直接離心原代細(xì)胞
糾正2:我們不建議在解凍后離心細(xì)胞,因?yàn)殡x心程序比少量的DMSO殘留更有害。記住,在恢復(fù)原代細(xì)胞后的第二天更換培養(yǎng)基以去除任何殘留的DMSO。
錯誤3:允許原代細(xì)胞變得過于融合
糾正3:當(dāng)生長至100%匯合時,原代細(xì)胞可以變得衰老。記住,原代細(xì)胞不是100%純,因此重要的是盡量減少污染細(xì)胞的生長。我們建議在細(xì)胞達(dá)到90-95%融合時,對原代細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
錯誤4:傳代原代細(xì)胞時過度胰蛋白酶消化
糾正4:當(dāng)細(xì)胞傳代時,使用低濃度的胰蛋白酶并在顯微鏡下密切監(jiān)測細(xì)胞。此外,記得在胰蛋白酶消化后*中和細(xì)胞中的胰酶,因?yàn)槿魏位钚缘囊鹊鞍酌付紝p傷細(xì)胞。
錯誤5:原代細(xì)胞可以很容易地重新凍存
糾正5:通常我們不推薦重新凍存原代細(xì)胞,因?yàn)檫@可以促進(jìn)細(xì)胞衰老和/或?qū)е鹿δ茏兓?。原代?xì)胞非常敏感,重新凍結(jié)可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡或損傷。
錯誤6:原代細(xì)胞可以無限的增殖
糾正6:與細(xì)胞系不同,原代細(xì)胞具有有限的擴(kuò)增能力。我們建議盡早使用原代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以防止遺傳漂移。此外,如果你正在使用一個增值困難的細(xì)胞類型,你應(yīng)該密切監(jiān)測細(xì)胞形態(tài),因?yàn)樯倭炕祀s的細(xì)胞(如成纖維細(xì)胞)可能隨著時間的推移,大量生長從而成為主要細(xì)胞。
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