纖維素酶是一種多組分酶,包括C1 酶、CX 酶和¦Â-葡萄糖苷酶三種主要組分。其中C1酶的作用是將天然纖維素水解成無定形纖維素,CX 酶的作用是將無定形纖維素繼續(xù)水解成纖維寡糖,Â-葡萄糖苷酶的作用是將纖維寡糖水解成葡萄糖。纖維素酶水解纖維素產(chǎn)生的纖維二糖、葡萄糖等還原糖能將堿性條件下的3,5-二硝基水楊酸(DNS)還原,生成棕紅色的氨基化合物,在540nm 波長處有zui大光吸收,在一定范圍內(nèi)還原糖的量與反應(yīng)液的顏色強(qiáng)度呈比例關(guān)系,利用比色法測(cè)定其還原糖生成的量就可測(cè)定纖維素酶的活力。
1.實(shí)驗(yàn)材料
(1)纖維素酶制劑 500mg
(2)濾紙 50mg / 份 × 4
(3)脫脂棉花 50mg / 份 × 4
(4)羧甲基纖維素鈉(CMC) 510mg
(5)水楊酸苷 500mg
2.主要儀器
(1)可見分光光度計(jì)
(2)恒溫水浴槽
(3)水浴鍋
(4)箱式電阻爐
(5)剪刀
(6)萬分之一分析天平
(7)恒溫干燥箱
(8)冰箱
(9)試管架
(10)膠頭滴管
(11)具塞刻度試管 20mL×24
(12)移液管或加液器 0.5 mL×3;2mL×7
(13)容量瓶 100 mL×6;1000 mL×3
(14)量筒 50 mL×2;100 mL×1;500 mL×1
(15)燒杯 100 mL×6;500mL×3;1 000 mL×1
3.試劑(均為分析純)
(1)濃度為1mg/mL 的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液
將葡萄糖在恒溫干燥箱中105℃下干燥至恒重,準(zhǔn)確稱取100mg 于100mL 小燒杯中,用少量蒸餾水溶解后,移入100mL 容量瓶中用蒸餾水定容至100mL,充分混勻。4℃冰箱中保存(可用12~15 天)。
(2)3,5-二硝基水楊酸(DNS)溶液
準(zhǔn)確稱取DNS 6.3g 于500mL 大燒杯中,用少量蒸餾水溶解后,加入2mol/L NaOH 溶液262mL,再加到500mL 含有185g 酒石酸鉀鈉(C4H4O6KNa · 4H2O,MW=282.22)的熱水溶液中,再加5g結(jié)晶酚(C6H5OH,MW=94.11)和5g無水亞硫酸鈉(Na2SO3,MW=126.04),攪拌溶解,冷卻后移入1 000mL 容量瓶中用蒸餾水定容至1 000mL,充分混勻。貯于棕色瓶中,室溫放置一周后使用。
(3)0.05 mol/L pH4.5 的檸檬酸緩沖液A 液(0.1 mol/L 檸檬酸溶液):準(zhǔn)確稱取C6H8O7 · H2O(MW=210.14)21.014g 于500mL大燒杯中,用少量蒸餾水溶解后,移入1 000mL 容量瓶中用蒸餾水定容至1 000mL,充分混勻。4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>
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